菊花为菊科植物菊 Chrysanthemum morifolium Ramat. 的干燥头状花序。药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”。本文分别对亳菊和杭菊进行了含量分析，改进后的方法（第 2 法）具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠等优特点。

　　 1  器材 　　氯仿、磷酸均为分析纯；甲醇、乙腈均为色谱纯； Agilent 1100 HPLC 化学工作站； Mettler AE240 电子天平；样品由湖北省宜昌市众生医药公司和湖北省红安县中医医院提供，经宜昌市药品检验所鉴定为“杭菊”，湖北某企业提供的菊花经鉴定为“亳菊”；绿原酸对照品（由中检所提供，供含量测定用，批号为 110753200212 ）。绿原酸 3-98% （ 上禾 生物 现货 供应 ） 　　 2  方法与结果 　　 2.1   第 1 法按《中国药典》 2005 年版Ⅰ部方法实验。 　　 2.1.1   色谱分析条件色谱柱为 Nucleosil C18(10 μ m, 4.6 mm × 250 mm ) ；柱温 25 ℃ ；流动相： 0.1 mol/L 磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（ NaH2PO4 ? 2H2O ） 15.6 g ，加水至 1 000 ml ，制成 0.1 mol/L 的溶液，加入磷酸适量，使 pH 值为 2.7 ］甲醇（ 70 ∶ 30 ）；检测波长 328 nm ；进样量 20 μ l ；流速 1.0 ml/min ； AUFS=0.12s 。 　　 2.1.2   对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含 0.1 mg 的溶液，即得（ 10 ℃ 以下保存）。 　　 2.1.3   供试品溶液的制备   取样品粉末（过 1 号筛）约 1 g ［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H 第 1 法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇 50 ml ，称定重量，加热回流 2 h ，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10 ml ，蒸干，残渣加氯仿 5 ml ，浸渍 3 min ，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水适量使溶解，并转移至 5 ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（ 0.45 μ m ）滤过，即得（应于当日测定）。

　　 2.2  第 2 法（改进后的方法） 　　 2.2.1   色谱分析条件 流动相：乙腈 0.4% 磷酸溶液（ 12 ∶ 88 ），其余同第 1 法。 　　 2.2.2   对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加 50% 甲醇制成每毫升含 0.1 mg 的溶液，即得（ 10 ℃ 以下保存）。 　　 2.2.3   供试品溶液的制备 取样品粉末约 0.5 g ［同时另取样品粉末测定水分（附录Ⅸ H 第 1 法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 50% 甲醇 50 ml ，称定重量，超声处理 30 min ，放冷，再称定重量，用 50% 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 ml ，置 25 ml 棕色量瓶中，加 50% 甲醇至刻度，摇匀，即得。 　　 2.3  系统适应性实验 　　 2.3.1   第 1 法按《中国药典》 2005 年版Ⅰ部方法实验。理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 4 495 ，符合《中国药典》规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样 5 次，所得峰面积积分值为 5 753 ， 5 748 ， 5 747 ， 5 750 ， 5 747 ， RSD= 0.04% (n=5) 。 2.3.2  第 2 法（改进后的方法）理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为 5 241 ，符合药典规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样 5 次，所得峰面积积分值为 5 908 ， 5 891 ， 5 893 ， 5 889 ， 5 885 ， RSD=0.15%(n=5) 。 　　 2.4  样品测定结果 　　 2.4.1   第 1 法将样品依法处理。结果见表 1 。 　　表 1  3 批菊花样品的测定结果 ( 略 ) 　　 2.4.2   第 2 法（改进后的方法）将样品依法处理。结果见表 2 。 　　表 2  3 批菊花样品的测定结果 ( 略 ) 　　 2.5  回收率实验 ( 第 2 法 )   精密称取众生药业提供的菊花样品约 0.5 g ，定量加入适量的绿原酸对照品，下同供试品项下操作，在上述色谱条件下测定，测得平均回收率为 99.9% 。结果见表 3 。 　　表 3   绿原酸回收率实验结果 ( 略 ) 　　 3  讨论 　　 3.1  菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，样品溶液的提取比较复杂，含量损失大，特别是从蒸发皿中用水洗涤定容至 5 ml 量瓶中，误差大， 测出的含量要比实际的含量低。 　　 3.2  菊花按《中国药典》的方法测定绿原酸的含量，其色谱条件不是很理想，流动相的比例要改为 80 ∶ 20 ，效果会更好，特别对质量很差的菊花更要注意。本实验的样品由于湖北某企业贮存时间太长，严重褪色，含量很低。若不改动流动相的比例，则色谱图的分离效果很差。 　　 3.3   改进后的方法中样品溶液的制备方法简便、损失量少、使得测定的结果更加准确可靠，测出的含量要比第 1 法高，为标准的修订提供可行的依据。